基于UPLC-Q TOF-MSE技术的藤黄健骨丸指纹图谱建立及共有峰鉴定

doi:10.19894/j.issn.1000-0518.230355

摘要/Abstract

摘要：

建立藤黄健骨丸高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，完善产品质量标准。采用Waters Symmetry C18（150 mm×2.1 mm，3.5 μm）色谱柱；流速为0.4 mL/min；进样量为2 μL；紫外检测波长为260 nm；在柱温30 ℃下以0.1%甲酸水（A）和0.1%甲酸乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版本）”建立藤黄健骨丸指纹图谱，并分析相似度。采用液质联用技术（UPLC-Q TOF-MS^E），根据化合物串联质谱信息结合对照品进行了共有峰结构鉴定。共确定了10批藤黄健骨丸指纹图谱中20个共有峰，相似度均在0.95以上。基于对照品和串联质谱信息指认了共有峰中13种成分的结构，并进行了峰归属。对10批藤黄健骨丸指纹图谱共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行了计算，结果显示各批次样品共有峰的相对保留时间和相对峰面积均比较稳定，表明它们所对应的各成分含量较为均一。采用该指纹图谱对中间体进行了相似度评价，发现中间体与成品相关性良好。该方法精密度、重复性和稳定性好，不仅可用于藤黄健骨丸成品的质量控制，还可对中间体进行检测，用于生产过程的控制。

关键词: 藤黄健骨丸, 高效液相色谱, 指纹图谱, 液质联用

Abstract:

To establish the high performance liquid chromatographic （HPLC） fingerprint of Tenghuang Jiangu Wan （THJGW） and improve its quality standard，a Waters Symmetry C18 column （150 mm×2.1 mm， 3.5 μm） was used and a gradient elution with 0.1% formic acid in water （A） and 0.1% formic acid in acetonitrile （B） was performed as the mobile phase. The flow rate was 0.4 mL/min， the column temperature was 30 ℃， the injection volume was 2 μL and the detection wavelength was 260 nm. The fingerprint of THJGW was established and analyzed for its similarity by using the “Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System （2012 version）”. The identification of common peaks was characterized by ultra performance liquid chromatography-quadrupole time of flight-mass spectrometry （UPLC-Q TOF-MS^E） combining with reference standards. The relative retention times and relative peak areas of common peaks in the fingerprints of 10 batches of Tenghuang Jiangu Wan were calculated. A total of 20 common peaks were determined in the fingerprints of 10 batches from THJGW， and the similarities were all above 0.95. Based on the information of reference standards and tandem mass spectrometry， the structures of 13 components in the common peaks were identified. And then， the corresponding Chinese medicines for each peak were attributed. The relative retention times and relative peak areas of common peaks in all batches of samples were relatively stable， corresponding to a constant content of ingredients. The similarity of the intermediates was evaluated using this fingerprint and showed a good correlation between intermediates and finished products. This method is precise， reproducible and stabilized. It can be used not only for quality control of the finished product of THJGW， but also for the detection of the intermediates.

Key words: Tenghuang Jiangu Wan, High performance liquid chromatographic, Fingerprint, Ultra performance liquid chromatography-quadrupole time of flight-mass spectrometry

中图分类号:

O656

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图/表 7

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Peaks （No.）	Retention time/min	Selected ion	Observed（m/z）	Mass error/（mg·L^-1）	Major product ions （m/z）	Compound	Attribution
1	4.13	［M－H］^－	331.103 8	1.0	179.056 0	Koaburaside	a
2	5.95	［M－H］^－	595.166 5	-0.7	459.113 7， 235.024 5	Neoeriocitrin	b
3	9.12	［M+H］⁺	825.278 9	-2.8	663.229 9， 517.170 4， 355.118 0	Diphylloside A	c
5	18.37	［M－H］^－	785.250 6	-0.4	623.218 8， 461.166 0， 179.034 7	Echinacoside	d
7	22.14	［M－H］^-	623.197 6	-0.9	461.164 9， 315.104 8， 179.035 5	Acteoside	d，e
8	23.61	［M－H］^－	579.171 2	-1.2	271.060 7， 151.003 3	Naringin	b
9	24.14	［M+H］⁺	273.075 9	0.6	153.018 1， 119.049 2	Naringenin	b
10	27.06	［M－H］^－	753.224 8	0.2	223.060 4， 205.050 3， 190.026 6	3，6-Disinapoyl sucrose	f
11	28.23	［M+HCOO］^－	853.276 7	-0.6	645.218 2， 366.110 4， 351.087 0	Epimedin B	c
12	34.51	［M+HCOO］^－	721.234 3	-0.8	513.175 9， 367.117 5， 351.086 6	Icariin	c
13	34.81	［M－H］^－	659.233 5	-1.6	367.116 5， 351.086 9， 323.092 0	2-O-Rhamnosylicariside Ⅱ	c
17	40.36	［M－H］^－	529.170 6	-1.8	367.117 7， 352.092 9	Icariside Ⅰ	c
19	41.39	［M－H］^－	513.176 0	-1.2	367.116 4， 352.091 2， 324.096 6	Icariside Ⅱ	c

Peaks （No.）	Retention time/min	Selected ion	Observed（m/z）	Mass error/（mg·L^-1）	Major product ions （m/z）	Compound	Attribution
1	4.13	［M－H］^－	331.103 8	1.0	179.056 0	Koaburaside	a
2	5.95	［M－H］^－	595.166 5	-0.7	459.113 7， 235.024 5	Neoeriocitrin	b
3	9.12	［M+H］⁺	825.278 9	-2.8	663.229 9， 517.170 4， 355.118 0	Diphylloside A	c
5	18.37	［M－H］^－	785.250 6	-0.4	623.218 8， 461.166 0， 179.034 7	Echinacoside	d
7	22.14	［M－H］^-	623.197 6	-0.9	461.164 9， 315.104 8， 179.035 5	Acteoside	d，e
8	23.61	［M－H］^－	579.171 2	-1.2	271.060 7， 151.003 3	Naringin	b
9	24.14	［M+H］⁺	273.075 9	0.6	153.018 1， 119.049 2	Naringenin	b
10	27.06	［M－H］^－	753.224 8	0.2	223.060 4， 205.050 3， 190.026 6	3，6-Disinapoyl sucrose	f
11	28.23	［M+HCOO］^－	853.276 7	-0.6	645.218 2， 366.110 4， 351.087 0	Epimedin B	c
12	34.51	［M+HCOO］^－	721.234 3	-0.8	513.175 9， 367.117 5， 351.086 6	Icariin	c
13	34.81	［M－H］^－	659.233 5	-1.6	367.116 5， 351.086 9， 323.092 0	2-O-Rhamnosylicariside Ⅱ	c
17	40.36	［M－H］^－	529.170 6	-1.8	367.117 7， 352.092 9	Icariside Ⅰ	c
19	41.39	［M－H］^－	513.176 0	-1.2	367.116 4， 352.091 2， 324.096 6	Icariside Ⅱ	c

Batch No.	X1	X2	X3	X4	X5	X6	X7	X8	X9	X10	R
X1	1.000	0.998	0.997	0.998	0.959	0.982	0.980	0.959	0.979	0.967	0.991
X2	0.998	1.000	1.000	0.999	0.968	0.987	0.986	0.966	0.984	0.973	0.995
X3	0.997	1.000	1.000	0.999	0.970	0.987	0.987	0.967	0.984	0.973	0.995
X4	0.998	0.999	0.999	1.000	0.964	0.984	0.983	0.962	0.980	0.969	0.992
X5	0.959	0.968	0.970	0.964	1.000	0.994	0.994	0.996	0.993	0.994	0.988
X6	0.982	0.987	0.987	0.984	0.994	1.000	0.999	0.992	0.998	0.995	0.998
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X8	0.959	0.966	0.967	0.962	0.996	0.992	0.992	1.000	0.996	0.998	0.987
X9	0.979	0.984	0.984	0.980	0.993	0.998	0.997	0.996	1.000	0.998	0.997
X10	0.967	0.973	0.973	0.969	0.994	0.995	0.995	0.998	0.998	1.000	0.991
R	0.991	0.995	0.995	0.992	0.988	0.998	0.997	0.987	0.997	0.991	1.000

Batch No.	X1	X2	X3	X4	X5	X6	X7	X8	X9	X10	R
X1	1.000	0.998	0.997	0.998	0.959	0.982	0.980	0.959	0.979	0.967	0.991
X2	0.998	1.000	1.000	0.999	0.968	0.987	0.986	0.966	0.984	0.973	0.995
X3	0.997	1.000	1.000	0.999	0.970	0.987	0.987	0.967	0.984	0.973	0.995
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X8	0.959	0.966	0.967	0.962	0.996	0.992	0.992	1.000	0.996	0.998	0.987
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Batch No.	R	Z1	Z2	Z3	Z4	Z5	Z6	Z7	Z8	Z9	Z10
R	1.000	0.975	0.981	0.985	0.981	0.995	0.998	0.998	0.995	0.998	0.997
Z1	0.975	1.000	0.995	0.997	0.997	0.956	0.981	0.974	0.954	0.980	0.968
Z2	0.981	0.995	1.000	0.999	0.999	0.967	0.988	0.983	0.961	0.984	0.971
Z3	0.985	0.997	0.999	1.000	0.999	0.972	0.990	0.986	0.967	0.987	0.976
Z4	0.981	0.997	0.999	0.999	1.000	0.965	0.987	0.981	0.961	0.984	0.972
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Z8	0.995	0.954	0.961	0.967	0.961	0.995	0.991	0.991	1.000	0.994	0.997
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