基于UPLC -Q TOF -MS ^E技术的藤黄健骨丸指纹图谱建立及共有峰鉴定

谢东, 胡健楠, 李念, 杨桔, 黄青, 皮子凤, 郑飞, 戴雨霖, 越皓

应用化学 2024, 41 (3): 437-444. DOI:10.19894/j.issn.1000-0518.230355

摘要（41）

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建立藤黄健骨丸高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，完善产品质量标准。采用Waters Symmetry C18（150 mm×2.1 mm，3.5 μm）色谱柱；流速为0.4 mL/min；进样量为2 μL；紫外检测波长为260 nm；在柱温30 ℃下以0.1%甲酸水（A）和0.1%甲酸乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版本）”建立藤黄健骨丸指纹图谱，并分析相似度。采用液质联用技术（UPLC-Q TOF-MS^E），根据化合物串联质谱信息结合对照品进行了共有峰结构鉴定。共确定了10批藤黄健骨丸指纹图谱中20个共有峰，相似度均在0.95以上。基于对照品和串联质谱信息指认了共有峰中13种成分的结构，并进行了峰归属。对10批藤黄健骨丸指纹图谱共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行了计算，结果显示各批次样品共有峰的相对保留时间和相对峰面积均比较稳定，表明它们所对应的各成分含量较为均一。采用该指纹图谱对中间体进行了相似度评价，发现中间体与成品相关性良好。该方法精密度、重复性和稳定性好，不仅可用于藤黄健骨丸成品的质量控制，还可对中间体进行检测，用于生产过程的控制。

Batch No.	X1	X2	X3	X4	X5	X6	X7	X8	X9	X10	R
X1	1.000	0.998	0.997	0.998	0.959	0.982	0.980	0.959	0.979	0.967	0.991
X2	0.998	1.000	1.000	0.999	0.968	0.987	0.986	0.966	0.984	0.973	0.995
X3	0.997	1.000	1.000	0.999	0.970	0.987	0.987	0.967	0.984	0.973	0.995
X4	0.998	0.999	0.999	1.000	0.964	0.984	0.983	0.962	0.980	0.969	0.992
X5	0.959	0.968	0.970	0.964	1.000	0.994	0.994	0.996	0.993	0.994	0.988
X6	0.982	0.987	0.987	0.984	0.994	1.000	0.999	0.992	0.998	0.995	0.998
X7	0.980	0.986	0.987	0.983	0.994	0.999	1.000	0.992	0.997	0.995	0.997
X8	0.959	0.966	0.967	0.962	0.996	0.992	0.992	1.000	0.996	0.998	0.987
X9	0.979	0.984	0.984	0.980	0.993	0.998	0.997	0.996	1.000	0.998	0.997
X10	0.967	0.973	0.973	0.969	0.994	0.995	0.995	0.998	0.998	1.000	0.991
R	0.991	0.995	0.995	0.992	0.988	0.998	0.997	0.987	0.997	0.991	1.000

取藤黄健骨丸10批中间体和10批成品的供试品溶液进行色谱分析并记录色谱图，导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版本）”选择X1作为参照图谱，采用中位数法，时间窗宽度设置为0.1，再进行多点校正以及Mark峰的匹配，建立10批成品的指纹图谱，并自动生成对照指纹图谱R。再以生成的对照指纹图谱R为参照图谱，对10批中间体色谱图同法建立中间体-成品指纹图谱。分别计算它们的相似度，结果见表2和3。10批藤黄健骨丸（成品）的指纹图谱相似度均在0.95以上，表明各批样品之间质量均一、稳定，制剂工艺稳定。中间体-成品指纹图谱的相似度在0.954~1.000范围内，说明藤黄健骨丸由中间体加蜜制备成品丸剂的工艺过程中，化学成分的损失较少，主要成分均在中间体及成品中体现，表明中间体与成品间相关性较好，该制剂工艺稳定。