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基于UPLC -Q TOF -MS ^E技术的藤黄健骨丸指纹图谱建立及共有峰鉴定

谢东, 胡健楠, 李念, 杨桔, 黄青, 皮子凤, 郑飞, 戴雨霖, 越皓

应用化学 2024, 41 (3): 437-444. DOI:10.19894/j.issn.1000-0518.230355

摘要（41）

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PDF （1617KB）（26）

建立藤黄健骨丸高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，完善产品质量标准。采用Waters Symmetry C18（150 mm×2.1 mm，3.5 μm）色谱柱；流速为0.4 mL/min；进样量为2 μL；紫外检测波长为260 nm；在柱温30 ℃下以0.1%甲酸水（A）和0.1%甲酸乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版本）”建立藤黄健骨丸指纹图谱，并分析相似度。采用液质联用技术（UPLC-Q TOF-MS^E），根据化合物串联质谱信息结合对照品进行了共有峰结构鉴定。共确定了10批藤黄健骨丸指纹图谱中20个共有峰，相似度均在0.95以上。基于对照品和串联质谱信息指认了共有峰中13种成分的结构，并进行了峰归属。对10批藤黄健骨丸指纹图谱共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行了计算，结果显示各批次样品共有峰的相对保留时间和相对峰面积均比较稳定，表明它们所对应的各成分含量较为均一。采用该指纹图谱对中间体进行了相似度评价，发现中间体与成品相关性良好。该方法精密度、重复性和稳定性好，不仅可用于藤黄健骨丸成品的质量控制，还可对中间体进行检测，用于生产过程的控制。

Peaks （No.）	Retention time/min	Selected ion	Observed（m/z）	Mass error/（mg·L^-1）	Major product ions （m/z）	Compound	Attribution
1	4.13	［M－H］^－	331.103 8	1.0	179.056 0	Koaburaside	a
2	5.95	［M－H］^－	595.166 5	-0.7	459.113 7， 235.024 5	Neoeriocitrin	b
3	9.12	［M+H］⁺	825.278 9	-2.8	663.229 9， 517.170 4， 355.118 0	Diphylloside A	c
5	18.37	［M－H］^－	785.250 6	-0.4	623.218 8， 461.166 0， 179.034 7	Echinacoside	d
7	22.14	［M－H］^-	623.197 6	-0.9	461.164 9， 315.104 8， 179.035 5	Acteoside	d，e
8	23.61	［M－H］^－	579.171 2	-1.2	271.060 7， 151.003 3	Naringin	b
9	24.14	［M+H］⁺	273.075 9	0.6	153.018 1， 119.049 2	Naringenin	b
10	27.06	［M－H］^－	753.224 8	0.2	223.060 4， 205.050 3， 190.026 6	3，6-Disinapoyl sucrose	f
11	28.23	［M+HCOO］^－	853.276 7	-0.6	645.218 2， 366.110 4， 351.087 0	Epimedin B	c
12	34.51	［M+HCOO］^－	721.234 3	-0.8	513.175 9， 367.117 5， 351.086 6	Icariin	c
13	34.81	［M－H］^－	659.233 5	-1.6	367.116 5， 351.086 9， 323.092 0	2-O-Rhamnosylicariside Ⅱ	c
17	40.36	［M－H］^－	529.170 6	-1.8	367.117 7， 352.092 9	Icariside Ⅰ	c
19	41.39	［M－H］^－	513.176 0	-1.2	367.116 4， 352.091 2， 324.096 6	Icariside Ⅱ	c

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表1 13种共有峰的质谱鉴定

正文中引用本图/表的段落

取藤黄健骨丸（成品）样品连续进样测定6次，以5号色谱峰（松果菊苷）作为参照峰，计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间［18］。结果见辅助材料表S1和S2，各共有峰的相对峰面积的RSD值均小于1.86%，相对保留时间的RSD值均小于1.52%，表明该仪器精密度良好，满足分析质量要求。

对共有峰进行结构鉴定，共指认了13种成分。通过对比指纹图谱（图2谱线a）与对照品保留时间（图2谱线b-f）指认出其中5个峰：峰5为松果菊苷；峰7为毛蕊花糖苷；峰8为柚皮苷；峰12为淫羊藿苷；峰19为淫羊藿次苷Ⅱ。通过串联质谱共有峰分析指认出另外8种：峰1为3，5-二甲氧基-4-羟基苯基 β- D-葡萄糖苷；峰2为新北美圣草苷；峰3为双藿苷A；峰9为柚皮素；峰10为3，6-二芥子酰基蔗糖；峰11为朝藿定B；峰13为鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ；峰17为淫羊藿次苷Ⅰ。这些化合物的串联质谱信息如表1所示，以峰19的质谱裂解途径为例，简要说明它们的质谱指认过程。峰19在负离子模式下观察到准分子离子峰 m/ z 513.1760，其主要发生糖基和常见中性小分子的裂解，碎片离子集中在 m/z 367.1164、352.0912和324.0966处。 m/ z 367.1164的离子对应［M－H－Rha］－，是由一分子鼠李糖基的丢失产生。 m/ z 352.0912和 m/ z 324.0966的离子为中性分子的丢失，分别对应［M－H－Rha－CH ₃］－和［M－H－Rha－CH ₃－CO］－。通过在质谱中与对照品的保留时间及裂解途径进行比对，峰19被鉴定为淫羊藿次苷Ⅱ，其可能的裂解途径如图3所示。

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