基于UPLC -Q TOF -MS ^E技术的藤黄健骨丸指纹图谱建立及共有峰鉴定 应用化学    2024, 41 (3): 437-444.   DOI:10.19894/j.issn.1000-0518.230355

取10批藤黄健骨丸（成品）样品，依次进样测定并记录色谱图，利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版本）”对供试品溶液的色谱图（X1-X10）进行分析，选择X1作为参照图谱，采用中位数法，时间窗宽度设置为0.1，再进行多点校正以及Mark峰的匹配，最终获得10批成品的指纹图谱（图1），并自动生成对照指纹图谱R（图2A谱线a）［19］。因5号峰峰面积大，分离度好，保留时间及峰面积稳定，因此以5号峰为参照峰，共标定出20个共有峰，共有峰面积占总峰面积90%以上。

对共有峰进行结构鉴定，共指认了13种成分。通过对比指纹图谱（图2谱线a）与对照品保留时间（图2谱线b-f）指认出其中5个峰： 峰5为松果菊苷； 峰7为毛蕊花糖苷； 峰8为柚皮苷； 峰12为淫羊藿苷； 峰19为淫羊藿次苷Ⅱ。通过串联质谱共有峰分析指认出另外8种： 峰1为3，5-二甲氧基-4-羟基苯基 β- D-葡萄糖苷； 峰2为新北美圣草苷； 峰3为双藿苷A； 峰9为柚皮素； 峰10为3，6-二芥子酰基蔗糖； 峰11为朝藿定B； 峰13为鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ；峰17为淫羊藿次苷Ⅰ。这些化合物的串联质谱信息如表1所示，以峰19的质谱裂解途径为例，简要说明它们的质谱指认过程。峰19在负离子模式下观察到准分子离子峰 m/ z 513.1760，其主要发生糖基和常见中性小分子的裂解，碎片离子集中在 m/z 367.1164、352.0912和324.0966处。 m/ z 367.1164的离子对应［M－H－Rha］－，是由一分子鼠李糖基的丢失产生。 m/ z 352.0912和 m/ z 324.0966的离子为中性分子的丢失，分别对应［M－H－Rha－CH ₃］－和［M－H－Rha－CH ₃－CO］－。通过在质谱中与对照品的保留时间及裂解途径进行比对，峰19被鉴定为淫羊藿次苷Ⅱ，其可能的裂解途径如图3所示。

取藤黄健骨丸10批中间体和10批成品的供试品溶液进行色谱分析并记录色谱图，导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版本）”选择X1作为参照图谱，采用中位数法，时间窗宽度设置为0.1，再进行多点校正以及Mark峰的匹配，建立10批成品的指纹图谱，并自动生成对照指纹图谱R。再以生成的对照指纹图谱R为参照图谱，对10批中间体色谱图同法建立中间体-成品指纹图谱。分别计算它们的相似度，结果见表2和3。10批藤黄健骨丸（成品）的指纹图谱相似度均在0.95以上，表明各批样品之间质量均一、稳定，制剂工艺稳定。中间体-成品指纹图谱的相似度在0.954~1.000范围内，说明藤黄健骨丸由中间体加蜜制备成品丸剂的工艺过程中，化学成分的损失较少，主要成分均在中间体及成品中体现，表明中间体与成品间相关性较好，该制剂工艺稳定。