表没食子儿茶素没食子酸酯与表没食子儿茶素没食子酸酯-β-环糊精抗破骨细胞生成作用对运动员骨质疏松的防治

doi:10.19894/j.issn.1000-0518.250276

摘要/Abstract

摘要：

本文旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）及其与β-环糊精（β-CD）的复合物（EGCG-β-CD）在抗破骨细胞生成及防治运动员骨质疏松中的作用差异。通过高效液相色谱（HPLC）证实EGCG与β-CD成功包合，n（EGCG）∶n（β-CD）=1.89∶1。利用核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导的RAW264.7破骨细胞分化模型，通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白免疫印迹分析评估发现，在相同浓度（10 μmol/L）下，EGCG-β-CD复合物对破骨细胞分化的抑制效果显著强于EGCG，表现为成熟破骨细胞数量减少（P＜0.05），破骨细胞标志基因NFATc1、CTSK、TRAP的mRNA及蛋白表达水平显著下调（P＜0.001）。研究表明，β-CD通过与EGCG形成特定化学计量比的包合物，协同提升其抗破骨细胞活性，为运动员骨质疏松的防治提供了新型植物活性成分递送策略。

关键词: 骨质疏松, 破骨细胞, 表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）, β-环糊精, EGCG-β-CD复合物

Abstract:

The purpose of this study was to explore the effect of epigallocatechin gallate （EGCG） and its inclusion complex with β-cyclodextrin （β-CD）（EGCG-β-CD） on anti osteoclastogenesis and prevention of osteoporosis in athletes. The successful inclusion of EGCG and β-CD was confirmed by high-performance liquid chromatography （HPLC）， and the binding stoichiometry was 1.89∶1. Using the RAW264.7 osteoclast differentiation model induced by RANKL， the tartrate resistant acid phosphatase （TRAP） staining， real-time fluorescent quantitative PCR （qRT-PCR） and Western blot analysis showed that at the same concentration （10 μmol/L）， the inhibitory effect of EGCG-β-CD complex on osteoclast differentiation was significantly stronger than that of EGCG， which showed that the number of mature osteoclasts decreased （P＜0.05）， and the mRNA and protein expression levels of osteoclast marker genes NFATc1， CTSK and TRAP were significantly down regulated （P＜0.001）. Studies have shown that β-CD synergistically enhances its anti osteoclast activity by forming a specific stoichiometric inclusion complex with EGCG， providing a new delivery strategy of plant active ingredients for the prevention and treatment of osteoporosis in athletes.

Key words: Osteoporosis, Osteoclasts, Epigallocatechin gallate, β-Cyclodextrin, EGCG-β-CD complex

中图分类号:

O622

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图/表 4

图1 EGCG的HPLC标准曲线

Fig.1 HPLC calibration curve of EGCG

图2 EGCG（A）和EGCG-β-CD（B）的HPLC图谱

Fig.2 HPLC chromatograms of EGCG （A） and EGCG-β-CD （B）

图3 EGCG和EGCG-β-CD复合物TRAP染色结果A： TRAP staining in the Control group； B： TRAP staining in the RANKL group； C： TRAP staining in the RANKL+β-CD group； D： TRAP staining in the RANKL+EGCG group； TRAP staining in the E： RANKL+EGCG-β-CD group； F： Statistics of TRAP staining results

Fig.3 EGCG and EGCG-β-CD complex TRAP staining results

图4 NFATc1（A）、MMP-9（B）和TRAP（C）的基因表达水平及NFATc1（D）蛋白表达水平

Fig.4 Gene expression levels of NFATc1 （A）， MMP-9 （B） and TRAP （C）， as well as protein expression level of NFATc1 （D）

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